对硝基酚(p－nitrophenol，p－NP)是一种重要的化工原料，广泛存在于医药、有机农药、炸药、染料、焦化以及煤气生产企业、石油化工厂、绝缘材料厂等排放的废水中，是典型的难降解、持久性有机化合物。它具有“致癌、致畸、致突变”等特点，被美国环保局规定为优先控制污染物［1］，也是我国水体优先控制黑名单中的危险化合物［2］。对硝基酚是硝基苯酚中毒性较强的一种，具有累积效应，容易被皮肤和肺吸收，毒性可以通过食物链传递和放大，除了对水生生物产生毒害作用，还可进一步危及陆生动物、鸟类和人类的健康［3－5］，因此探讨对硝基酚对水体生物的毒性作用具有非常重要的意义。然而，以往关于对硝基酚的研究大多集中在如何降解、除去废水和土壤中的对硝基酚［6－7］，而其对鱼类的毒理学研究资料还相对较少［8－10］。
稀有 鲫(Gobiocypris rarus)是一种鱼类毒性试验材料，具有实验室易饲养、性成熟时间和性周期短、个体小、以及对化学物质敏感等优点。已有试验证实，稀有 鲫对重金属、农药等化学品非常敏感，是进行化学品毒性测试和环境水样毒性实验的理想材料［11］。熊力等［12］研究了五氯酚对稀有 鲫胚胎的毒性效应;王志坚等［13］和Zhu等［14］分别探讨了氨氮和3，4－二氯苯胺对稀有 鲫胚胎及仔鱼的毒性;本研究主要探讨了对硝基酚对稀有 鲫胚胎的毒性效应，观察对硝基酚化合物暴露对胚胎发育过程和孵化效果的影响，以期完善对硝基酚对水生生物毒性的评价欠缺，为制定对硝基酚环境排放标准以及风险管理提供可靠的毒理学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
对硝基酚，国产分析纯试剂，淡黄色结晶，纯度为99.5%，溶液稳定性良好，适合做静态染毒实验［8］。在实验前统一配置好母液，再用蒸馏水稀释，分别配置成1、2、4、8、16 mg/L的对硝基酚溶液，密封遮光保存。
实验受精卵是实验室特定的循环养殖系统中长期饲养的稀有 鲫亲鱼以雌雄1∶1配对，采用人工干法授精获取的受精卵。
1.2 实验方法
参考 Schalte［15］和 OECD［16］的研究方法和预实验结果，本试验设置1个空白对照组(0 mg/L)和1、2、4、8、16 mg/L 5个对硝基酚溶液实验组，实验选用24孔细胞培养板作为胚胎染毒实验容器，每孔容积3 μL，实验时每孔放入5枚正常的受精卵，每4个孔为一组，即每一个浓度组取20枚受精卵实验，用已配好的对硝基酚溶液对受精4 h的受精卵进行染毒，每孔加入2 mL实验溶液，然后将24孔细胞培养板置于精密恒温水浴锅中，水温为()℃，每24 h换1/2同等浓度的对硝基酚实验溶液，以保证药液溶氧量、pH、水温及其他理化指标的稳定［17］，并及时清除死亡个体，直至其正常孵化。记录投毒后12、24、36、48、60、72、96 h胚胎发育过程中具有代表性的毒理学特征［18］并进行拍照;计数胚胎孵化率、成活率、各个时期胚胎发育特征及畸形特点如卵凝结、卵黄囊水肿、脊柱弯曲、尾部弯曲、发育异常等，同时计数1 min内仔鱼的心率和自主运动频率，试验重复3次。
1.3 计算方法
1.3.1 自主运动次数的统计
稀有 鲫胚胎发育到24 h能观察到明显的自主运动现象，每个实验组随机选取8枚受精卵，在Nikon SMZ1000体视显微镜下观察并拍照，同时记录1 min自主运动次数，测算每分钟平均次数。
1.3.2 心率的统计
稀有 鲫胚胎发育到48 h能观察到明显的心脏搏动，每个实验组随机选取8枚受精卵，在Nikon SMZ1000体视显微镜下观察并照相，同时记录1 min内胚胎心跳次数，测算胚胎每分钟的平均心率［13］。
1.3.3 仔鱼体长的计算
实验选取96 h后的仔鱼在Nikon SMZ1000体视显微镜进行拍照，然后用Image－pro plus 6.0图象软件分析计算稀有 鲫仔鱼体长，测算其平均值。
1.3.4 孵化率、成活率的计算
依据熊力等［12］的计算方式:
稀有 鲫胚胎孵化率=孵化的稀有 鲫胚胎数量÷总的稀有 鲫胚胎数量×100%
96 h相对成活率=96 h成活的稀有 鲫胚胎数量÷空白对照组成活的稀有 鲫胚胎数量×100%
1.4 数据处理
用spss17.0及excel软件对处理浓度的数值与个体死亡概率值的关系进行回归分析，分别计算24、48、72、96 h的半致死浓度(LC50)，并且采用公式:48 h LC50×0.3/(24 h LC50/48 h LC50)2计算安全浓度(SC)［19］，同时对实验中胚胎的死亡率、心率、孵化率等数据进行分析。并用统计检验水平判断实验组与对照组是否有显著性差别，显著水平为P＜0.05。 上一篇：中俄材料界大咖共叙新材料发展 下一篇：没有了